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產(chǎn)品名稱:

禽流感病毒H5N6亞型(AIV-H5N6)熒光探針PCR核酸檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品型號(hào): 產(chǎn)品時(shí)間: 2023-07-05
禽流感病毒H5N6亞型(AIV-H5N6熒光PCR試劑盒用禽流感病毒H5N6亞型的特異性引物,分別結(jié)合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對(duì)禽流感病毒H5N6亞型 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè), 用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。
本試劑盒適用于檢測(cè)標(biāo)本中的禽流感病毒H5N6亞型 RNA,適用于禽流感病毒H5N6亞型感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查,其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

產(chǎn)品概述

禽流感病毒H5N6亞型(AIV-H5N6熒光PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品名稱】

商品名稱:禽流感病毒 H5N6 亞型(AIV- H5N6)核酸檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光-PCR法)

Name :Diagnostic Kit for Avian Influenza Virus subtype H5N6 RNA (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)標(biāo)本中的禽流感病毒 H5N6 亞型 RNA,適用于禽流感病毒 H5N6 亞型感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查,其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒用禽流感病毒 H5N6 亞型的特異性引物,分別結(jié)合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對(duì)禽流感病毒 H5N6 亞型 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè), 用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

名 稱 規(guī) 格

酶液 50μL×1 管

AIV-H5N6 反應(yīng)液 1.0mL×1 管

AIV-H5N6 陽(yáng)性質(zhì)控品 50μL ×1 管

陰性質(zhì)控品 250μL ×1 管

說(shuō)明:不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 7 次,有效期 9 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、Eppendorf 2/4 Color Systems、Bio-RadCFX96、Roche Gene 6000、Roche LC480 等熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】

病死或撲殺禽,取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織;待檢活禽,用棉拭子   取呼吸道分泌物或排泄物,置于 1mL 50%甘油生理鹽水中。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過(guò) 6 個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1.樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1樣本前處理

每份組織分別從 3 個(gè)不同的位置稱取樣品約 1g,手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.05g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中;棉拭子直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒(離心柱提取法),請(qǐng)按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2.試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑 AIV-H5N6 反應(yīng)液 酶液

用量 20μL 1μL

3.加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的 RNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4.PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;熒光通道選擇: 檢測(cè)通道

(Reporter Dye)FAM、ROX, 淬滅通道(Quencher Dye)選擇NONE,

請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時(shí)間 收集熒光信號(hào)

1 1cycle 42℃ 20min 否

2 1 cycle 95℃ 10min 否

3 40 cycle 94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),重新分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

FAM 通道為禽流感病毒 H5 亞型檢測(cè)結(jié)果,ROX 通道為禽流感病毒 N1 亞型檢測(cè)結(jié)果

陽(yáng)性:檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線。

可疑:檢測(cè)通道 Ct 值>35.0,且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn),重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴(kuò)增曲線者為陽(yáng)性,否則為陰性。

陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú) Ct 值且無(wú)明顯的擴(kuò)增曲線。

6.檢測(cè)方法的局限性

樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;

陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果;

病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果;

本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

7.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:無(wú)明顯擴(kuò)增曲線且無(wú) Ct 值顯示;

陽(yáng)性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

【注意事項(xiàng)】

所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行;

試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,*混勻并短暫離心;

反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)工作服;

樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;

試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全   通則》進(jìn)行處理。

公司優(yōu)勢(shì):
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