小反芻獸通用疫苗PPR-U/PPR-V熒光PCR試劑盒說明書

通用名稱：小反芻獸疫通用型/疫苗株（PPR-U/ PPR-V）雙重核酸檢測試劑盒（實時熒光-PCR法）

英文名稱：Dual nucleic acid detection kit for universal/vaccine strain of small ruminant disease (PPR-U/PPR-V) (real-time fluorescence-PCR)

二、包裝規(guī)格  25T/盒、50T/盒

三、預期用途 小反芻獸疫病毒檢測試劑盒利用實時熒光PCR原理，定性檢測小反芻獸疫病毒，對小反芻獸疫病毒引起的疾病診斷及療效評估有重要指導意義。

四、小反芻獸疫病毒檢測試劑盒原理

   小反芻獸疫病毒檢測試劑盒針對小反芻獸疫病毒的高度保守區(qū)域設計特異性引物和探針，在反應體系中含小反芻獸疫病毒基因組模板的情況下，PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實時監(jiān)測和輸出，實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。

五、小反芻獸疫病毒檢測試劑盒組成

RT-PCR反應液、逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶、陽性對照、陰性對照

六、儲存及有效期

避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期為12個月。

七、適用儀器  ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。

【試劑組成】

名 稱 規(guī) 格

酶液 50μL×1 管

反應液 1.0mL×1 管

陽性質(zhì)控品 50μL ×1 管

陰性質(zhì)控品 250μL ×1 管

注：

1）不同批號試劑不能混用。

2）試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標示的檢測次數(shù)。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個月。

【標本采集】

病死或撲殺禽，取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織；待檢活禽，用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物，置于 1mL 50%甘油生理鹽水中。

【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的RNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請按照試劑盒說明書進行操作。

2.試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：

6.質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：無明顯擴增曲線丏無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，丏 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

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